PREPARAT IRISAN DENGAN METODE EMBEDDING/PARAFIN
No | Tahapan | Alat | Bahan | Waktu |
1 | Pengambilan sampel | -Silet -Petridish -Jarum pentul, gabus | -Air, Daun, jaringan hewan | 10 menit |
2 | Fiksasi | -Botol flakon | -Larutan fiksatip FAA | 24 jam |
3 | Pencucian | - | -Alkohol 70% | 10 menit |
4 | Dehidrasi | -Botol pipet | -Alkohol, 80%,90% dan absolut | 60 menit |
5 | Dealkoholisasi | -Botol Pipet | -Alkohol:xilol= 3:1,1:1,1:3 -Xilol murni I dan II | 5 jam |
6 | Infiltrasi | -Botol pipet -oven | -Campuran xilol paraffin (1:9), paraffin murni I dan II | 3 jam |
7 | Embedding | -Petridish | -Parafin murni cair -gliserin | 24 jam |
8 | Mengiris | -mikrotom rotari | - | 10 menit |
9 | Afiksing | -gelas benda -hot plate | -air -albumin meyer | 10 menit |
10 | Deparafinisasi | -staining jar | -Xilol murni I dan II | 30 menit |
11 | Pewarnaan | -Botol pipet -staining jar | -campuran alcohol-xylol 1:3,1:1,3:1,alk abs,90%,80%,70% -Safranin 1% dlm alkohol | 2 jam 15 menit |
12 | Pencucian | -botol pipet | -alkohol 70% sisa | 2 menit |
13 | Dehidrasi | -staining jar -botol pipet | -alkohol 80%,90%,absolut | 5 menit |
14 | Dealkoholisasi | -staining jar | -Alkohol:xilol= 3:1,1:1,1:3 -Xilol murni I dan II | 15 menit |
15 | Mounting & Labelling | -Alat tulis, label, kutek transparan -pipet | -Kanada Balsam | 20 menit |
16 | Mengamati dan menganalisis | -mikroskop -alat tulis -camera digital | - | 20 menit |
Total Waktu yang diperlukan | 61 jam 7 menit |
PROSEDUR PEMBUATAN PREPARAT IRISAN DENGAN METODE EMBEDDING
Mengambil sampel tumbuhan/hewan dan difiksasi dalam botol flakon dengan 2 ml larutan FAA selama 24 jam, diganti dengan alcohol 70% pencuci selama 5 menit, didehidrasi dengan alcohol 80%, 90% dan absolute masing-masing selama 1 jam, selanjutnya proses dealkokoholisasi dengan campuran alcohol dan xilol (3:1,1:1,1:3) dan Xilol murni I dan II masing-masing selama 1 jam, diganti dengan campuran xylol paraffin(1:9), Parafin murni I dan II masing-masing 1 jam didalam oven dengan suhu 60’C, diembedding pada petridish dengan diolesi sedikit gliserin sambil dibiarkan beku selama 24 jam, blok paraffin yang beku ditriming sehingga berbentuk trapezium, ditempelkan diatas holder, dengan mikrotom blok paraffin diiris pada ketebalan 5-10 um(koupes), hasil irisan ditempelkan pada gelas benda dengan perekat albumin meyer, gelas benda dimasukan dalam staining jar untuk proses deparafinisasi selama 15 menit, diwarnai dengan campuran alcohol-xylol 1:3,1:1,3:1,alk abs,90%,80%,70% masing-masing selama 2 menit, dilanjutkan dengan safranin 1% dlm alcohol selama 2 jam melalui staining jar, dicuci dengan alcohol sisa 70% selama 2 menit, Didehidrasi dalam staining jar dengan alkohol 80%,90%,absolute selama 2 menit, dimasukkan kedalam staining jar berisi Alkohol:xilol=3:1,1:1,1:3 ,Xilol murni I dan II masing-masing 2 menit, ditetesi kanada balsam pada proses mounting, dilanjutkan dengan proses labelling, pengamatan dengan mikroskop serta dianalisis hasilnya.